Реклама от ассоциации:
Главная страница » Законодательство » Хозяйственная деятельность » Промышленность » Определение антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов для внутривенного введения. Методические указания. МУК 3.3.2.1063-01


УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный

санитарный врач

Российской Федерации -

Первый заместитель

Министра здравоохранения

Российской Федерации

Г.Г.ОНИЩЕНКО

12 июля 2001 г.


Дата введения:

1 октября 2001 г.


3.3.2. МЕДИЦИНСКИЕ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИКОМПЛЕМЕНТАРНОЙ АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТОВ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ
MEASUREMENT OF ANTICOMPLEMENTARY ACTIVITY OF IMMUNOGLOBULINS FOR INTRAVENOUS USE
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 3.3.2.1063-01


1. В разработке методических указаний принимали участие сотрудники Нижегородского государственного предприятия по производству бактерийных препаратов - фирмы "ИмБио": к.м.н. Т.А.Крайнова, д.б.н. В.В.Анастасиев, Т.В.Короткова, Т.Б.Змачинская, Л.М.Ефремова; Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича: к.м.н. Л.В.Минакова, к.м.н. Л.К.Лаптева.

2. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 12 июля 2001 г.


1. Область применения


Настоящие методические указания предназначены для работников предприятий, осуществляющих контроль качества препаратов иммуноглобулинов для внутривенного введения.

Все положения настоящего документа распространяются на предприятия, производящие МИБП, независимо от их принадлежности и формы собственности.


2. Общие положения


Согласно требованиям ВОЗ, все серии иммуноглобулинов для внутривенного введения подлежат обязательному испытанию на антикомплементарную активность (АКА). (Материалы ВОЗ, 1992.) При внутривенном введении иммуноглобулинов с высокой антикомплементарной активностью у реципиента могут возникнуть тяжелые анафилактоидные реакции. Уровень АКА и клиническая безопасность являются предметом обсуждения более 10 лет (S.Munkarious, J.Hooper, 1988). Большинство исследователей полагает, что уровень АКА in vitro будет иметь значение для прогноза возможного побочного действия препаратов in vivo. У различных препаратов, производимых в мире, существенно различаются показатели АКА (J.Romer et all, 1982). Наличие значительных отличий в АКА дало основание отдельным авторам считать связь между АКА и безопасностью препарата при внутривенном введении сомнительной. Большинство же исследователей полагает, что данный тест является способом определения повреждения структуры иммуноглобулина и должен быть обязательно контролируемым параметром стабильности производства. Абсолютным критерием допуска к применению препаратов служит их переносимость при внутривенном введении.

Метод определения АКА основан на способности иммуноглобулинов связывать комплемент, препятствуя лизису сенсибилизированных эритроцитов.

Существует множество модификаций метода определения АКА. Методы определения и единицы измерения АКА, используемые различными авторами, трудно сравнимы.

Настоящие методические указания составлены с учетом требований Европейской фармакопеи 1997 г. Нами разработана модификация этого метода. Предлагаемый метод определения антикомплементарной активности иммуноглобулинов обладает достаточно высокой чувствительностью, хорошей воспроизводимостью и простотой выполнения. Важным преимуществом метода является выражение результатов определения в единицах комплемента, связавшегося с 1 мг белка иммуноглобулина. Это позволяет количественно оценивать как низкую, так и высокую антикомплементарную активность. Положительной чертой метода является также расширенный контроль реагентов, используемых для постановки реакции как комплемента, так и гемолитической сыворотки, что улучшает воспроизводимость результатов реакции. Настоящие рекомендации предназначены для определения антикомплементарной активности в препаратах иммуноглобулина для внутривенного введения на этапах его изготовления и хранения и вводятся взамен методических рекомендаций "Определение антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов" (Нижний Новгород, 1988).


3. Описание метода определения

антикомплементарной активности


Для измерения антикомплементарной активности иммуноглобулина фиксированное количество тестируемого материала (0,2 мл 5%-ного раствора препарата, т.е. 10 мг иммуноглобулина) инкубируют с определенным количеством комплемента морской свинки (20 гемолитических единиц СН50), и затем определяют количество несвязавшегося комплемента; антикомплементарную активность выражают как расход СН50 на 1 мг иммуноглобулина. Допустимый предел связывания комплемента - не более 1 гемолитической единицы СН50 на 1 мг иммуноглобулина для внутривенного введения.


3.1. Приготовление реактивов


Для постановки реакции необходимы следующие компоненты.


    Вода дистиллированная очищенная,                 ФС 42-2619-97

    соответствующая требованиям

    Цитратный раствор

    Базовый барбиталовый буферный раствор

    Базовый раствор кальция и магния

    Желатин-барбиталовый буферный раствор

    Эритроциты барана

    Гемолитическая сыворотка (гемолизин) или         ФС 42-223ВС-94

    любая аналогичная коммерческая сыворотка

    отечественного или импортного производства

    Комплемент морской свинки или любой              ФС 42-9ВС-91

    аналогичный препарат отечественного или

    импортного производства 0,1 н раствор

    едкого натра

    Испытуемый иммуноглобулин


3.1.1. Приготовление цитратного раствора


20,5 г глюкозы, 8,0 г натрия лимонно-кислого трехзамещенного и 4,2 г натрия хлорида растворяют в 750 мл дистиллированной воды. рН раствора доводят до 6,1 10%-ным раствором лимонной кислоты, объем - до 1000 мл дистиллированной водой. Стерилизуют текучим паром в течение 30 мин. при температуре 100 град. С. Хранят при температуре 4 град. С в течение месяца.


3.1.2. Приготовление базового раствора кальция и магния


2,2 г хлорида кальция двухводного и 10,17 г хлорида магния шестиводного растворяют в дистиллированной воде и доводят объем раствора до 100 мл. Хранят при температуре 4 град. С не более 1 месяца.


3.1.3. Приготовление базового раствора барбиталового буфера


В мерную колбу емкостью 2000 мл вносят 85 г хлорида натрия и 3,75 г барбитала натрия (мединала), добавляют 5,75 г барбитала (веронала), предварительно растворенного при нагревании в 200-300 мл дистиллированной воды, и устанавливают рН 7,3, используя 1 н соляную кислоту. Объем раствора доводят до 2000 мл дистиллированной водой. Стерилизуют текучим паром при 100 град. С в течение 30 мин. Хранят при температуре 4 град. С не более 1 месяца.


3.1.4. Приготовление рабочего желатин-барбиталового

буферного раствора (ЖББР)


1 г желатина растворяют в 400 мл дистиллированной воды при нагревании на водяной бане при температуре 70-100 град. С. Полученный раствор охлаждают и вносят в мерную колбу на 1000 мл, добавляют 1 мл базового раствора кальция и магния и 200 мл базового раствора барбиталового буфера. Объем раствора доводят до 1000 мл дистиллированной водой. Используют свежеприготовленным.


3.1.5. Приготовление эритроцитов барана


Берут один объем крови барана и один объем цитратного раствора, перемешивают. Хранят при температуре 4 град. С. Кровь можно использовать в течение 28 дней, но не ранее чем через 7 дней после взятия.


3.2. Постановка реакции определения

антикомплементарной активности иммуноглобулинов


3.2.1. Приготовление 5%-ной суспензии эритроцитов барана


Объем крови, необходимый для работы, отбирают стерильно и промывают физиологическим раствором. Промывку осуществляют с помощью центрифугирования суспензии в течение 10 мин. при 200 g (1,5-2 тыс. об./мин.). Осадок эритроцитов промывают не менее 3 раз 10-кратным (к объему эритроцитов) количеством желатин-барбиталового буферного раствора (ЖББР) до получения бесцветной промывной жидкости. 5%-ную суспензию эритроцитов готовят в том же самом буферном растворе. Плотность клеточной суспензии определяют следующим образом. К 0,2 мл суспензии эритроцитов добавляют 2,8 мл воды и центрифугируют гемолизированный раствор при 400 g (3-4 тысячи об./мин.). Измеряют оптическую плотность раствора в кювете с толщиной слоя 10 мм, против воды. Плотность клеточной суспензии считают приемлемой, если оптическая плотность надосадочной жидкости при длине волны 541 нм составляет 0,62 +/- 0,01. Корректируют плотность суспензии до этого показателя добавлением желатин-барбиталового буферного раствора в соответствии с формулой:


                                 Vн x A

                            Vк = -------, где

                                  0,62


Vк - конечный объем суспензии;

Vн  - начальный объем суспензии;

А - оптическая  плотность  исходной суспензии  при длине волны 541 нм.


Если оптическая плотность ниже 0,61, то добавляют необходимое количество отмытых эритроцитов.

В случае проведения анализа с использованием фотоэлектроколориметра берут 0,5 мл суспензии эритроцитов и 7,0 мл воды. Измерение проводят в кювете с толщиной оптического слоя 10 мм, при длине волны 540 нм. Плотность клеточной суспензии считают приемлемой в случае, если величина поглощения находится в пределах 0,59 +/- 0,1. При других показаниях корректируют плотность суспензии, как описано выше.


3.2.2. Титрование гемолитической сыворотки


Антисыворотку к эритроцитам барана (гемолизин) предварительно разводят ЖББР 1:10 (0,5 мл гемолизина + 4,5 мл ЖББР). Готовят разведения гемолизина 1:100, 1:200, 1:300, 1:400, 1:600, 1:800, 1:1600, 1:3200 с использованием ЖББР. Постановку эксперимента осуществляют в соответствии с табл. 1. Пробы гемолизина берут в двух повторностях. В качестве контроля самопроизвольного гемолиза используют пробы, не содержащие гемолизина, в двух повторностях. Для установления 100%-ного гемолиза используют контрольные пробы, в которые вносят дистиллированную воду вместо ЖББР (также в двух повторностях).


Таблица 1


Номер пробы   

1

10

Суспензия     
эритроцитов, мл

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

Раствор       
гемолитической
сыворотки, мл 

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

Разведение    

100

200

300

400

600

800

1600

3200

ЖББР, мл      

-

0,5

Вода, мл      

-

0,5

Инкубируют 15 мин. при 37 град. С и добавляют:                 

ЖББР, мл      

5,5

5,5

5,5

5,5

5,5

5,5

5,5

5,5

6,5

Комплемент, мл

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

Вода, мл      

-

6,5


Во все пробы вносят по 0,5 мл 5%-ной суспензии эритроцитов и инкубируют 15 мин. при 37 град. С. После инкубации в пробы вносят ЖББР и предварительно приготовленный раствор комплемента. Концентрацию раствора комплемента подбирают следующим образом (см. п. 3.2.4.). Для начала рекомендуется провести титрование с использованием разбавленного в 100 раз комплемента (ампула сухого комплемента растворяется в 1 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия и разводится ЖББР 1:100). Пробы инкубируют при 37 град. С 60 мин. Затем пробы охлаждают 10 мин. при 4 град. С и центрифугируют при 200 g (1,5-2,0 тыс. об./мин.) в течение 10 мин. Измеряют оптическую плотность надосадочной жидкости при длине волны 541 нм и рассчитывают степень гемолиза в каждой пробирке по формуле:


                            Aa - Ao

                        У = -------, где

                            Ar - Ao


Аa - оптическая плотность проб с разведениями гемолизина;

Аr  - оптическая плотность проб с полным гемолизом;

Аo  - оптическая плотность проб, не содержащих гемолизина.


                                       -----------------------¬

                                   ----+Разведение сыворотки, ¦

                                   ¦   ¦признанное оптимальным¦

             0,7 x    x    x    x<--   L-----------------------

             0,6 +----+----+----+----x--------------¬

                 ¦    ¦    ¦    ¦    ¦    x         ¦

             0,5 +----+----+----+----+----+---------+

Оптическая       ¦    ¦    ¦    ¦    ¦    ¦    x    ¦

плотность    0,4 +----+----+----+----+----+----+----+

             0,3 +----+----+----+----+----+----+----x

             0,2 +----+----+----+----+----+----+----+

             0,1 +----+----+----+----+----+----+----+

             0,0 L----+----+----+----+----+----+-----

                100  200  300  400  600  800 1600 3200

                          разведение сыворотки


Рис. 1. Титрование гемолитической сыворотки


Строят график, откладывая по оси ординат значения оптической плотности, а по оси абсцисс - соответствующие значения разведения гемолитической сыворотки. График должен иметь вид наклонной кривой, выходящей на плато (рис. 1, рис. 2 - не приводится).

Титрование гемолизина считается удовлетворительным, если максимальная степень гемолиза находится в пределах 0,5-0,7. Титрование повторяют с использованием более разведенного комплемента в случае, если гемолиз во всех пробах не ниже 0,6; или менее разбавленного комплемента, если максимальный гемолиз не выше 0,5. Если график имеет вид наклонной кривой, не выходящей на плато в области минимальных разведений гемолитической сыворотки, следует повторить титрование с использованием меньших разведений сыворотки (1:10-1:90). Если значения степени гемолиза во всех пробах примерно одинаковы, и данная тенденция сохраняется независимо от изменения концентрации комплемента, следует повторить опыт с использованием разведений сыворотки, больших 1:3200. Определяют минимальное разведение, при котором дальнейшее повышение количества гемолизина не вызывает заметного повышения степени гемолиза. Это разведение определяется как одна минимальная гемолитическая единица (1 МГЕ) в 1 мл. Для титрования используют разведение гемолизина, содержащее 2 МГЕ/мл. В табл. 2 и на рис. 2 (не приводится) приводится пример титрования гемолитической сыворотки. 1 МГЕ в данном примере - при разведении 1:400. При определении антикомплементарной активности препарата используют разведение сыворотки 1:200, т.е. 2 МГЕ/мл. При проведении последующих анализов с использованием образцов гемолитической сыворотки той же серии можно воспользоваться полученными данными, не повторяя каждый раз титрование. Рекомендуется, однако, проверять гемолитическую активность используемой серии сыворотки не реже одного раза в 6 месяцев.


Таблица 2


Номер 
пробы 

9  

10 

Разведение
сыворотки

100

200

300

400

600

800

1600

3200

кон-  
троль 
эритро-
цитов 

100%-
ный 
гемо-
лиз 

Среднее  
значение 
оптической
плотности,
541 нм   

0,35

0,35

0,35

0,35

0,31

0,28

0,21

0,15

0,01 

0,52

Степень  
гемолиза 
(У)      

0,69

0,69

0,69

0,69

0,61

0,55

0,43

0,29




3.2.3. Приготовление суспензии

сенсибилизированных эритроцитов барана


Готовят необходимый объем раствора гемолизина, содержащий 2 МГЕ/мл, и равный объем 5%-ной суспензии эритроцитов барана. Добавляют разведенный гемолизин к суспензии эритроцитов. Смесь инкубируют при 37 град. С в течение 15 мин., хранят при температуре 4 град. С и используют в течение 2 суток.


3.2.4. Титрование комплемента


Содержимое ампулы сухого комплемента растворяют в 1 мл 0,9%-ного хлорида натрия. Отбирают 0,1 мл и готовят определенное разведение комплемента, например 1:250, с использованием ЖББР. Проводят титрование комплемента, как показано в табл. 3, в двух повторностях. В каждую пробирку добавляют по 1,0 мл суспензии сенсибилизированных эритроцитов, тщательно перемешивают и инкубируют при 37 град. С в течение 60 мин. Пробирки охлаждают 10 мин. при 4 град. С и центрифугируют при 200 g (1,5-2 тыс. об./мин.) в течение 10 мин. Измеряют оптическую плотность надосадочной жидкости при длине волны 541 нм и определяют степень гемолиза (У), используя формулу:


                            An - Ao

                        У = -------, где

                            Ak - Ao


Аn - средняя оптическая плотность проб, по результатам двух повторностей;

Аk - средняя оптическая плотность контрольных проб с полным гемолизом;

Ao - средняя оптическая плотность контрольных проб при отсутствии гемолиза.


Результаты анализа учитывают, если в диапазон титрования входят значения 50%-ного гемолиза (табл. 3, рис. 3). Реакцию повторяют с использованием меньшего разведения комплемента при максимальном гемолизе, не превышающем 0,5; или большего разведения, если минимальный гемолиз больше 0,5, а также в том случае, если полученный график не пересекает линию со значением ординаты 0. Определяют значения десятичного логарифма соотношения [У/(1-У)] с использованием стандартного вычислительного оборудования, или соответствующих справочников (например В.М.Брадис "Четырехзначные математические таблицы"). Строят график на миллиметровой или логарифмической бумаге, откладывая по оси абсцисс, объем добавленного комплемента, а по оси ординат - значения логарифма [У/(1-У)]. Определяют объем комплемента, в котором содержится 1 СН50. Рассчитывают количество СН50/мл в исходном растворе комплемента, равное значению разведения комплемента, деленному на значение объема раствора комплемента V50, приводящего к 50%-ному гемолизу. В примере, приведенном в табл. 3 и на рис. 3, 1CH50 находится в объеме 1,9 мл. Таким образом, содержание комплемента в исходном растворе с учетом разведения: 250 : 1,9 = 131,5 СН50/мл. Затем путем разведения готовят раствор комплемента, содержащий 100 СН50/мл. В приведенном примере раствор комплемента нужно разбавить в 1,315 раза, т.е. к 1 мл раствора комплемента добавить 0,315 мл ЖББР.


Таблица 3


Номер пробы         

1  

Объем ЖББР, мл      

5,0 

4,5

4,0

3,5

3,0

6,5

Объем раствора      
комплемента, мл     

1,5 

2,0

2,5

3,0

3,5

Объем воды, мл      

-  

6,5

Объем суспензии     
сенсибилизированных 
эритроцитов, мл     

1,0 

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

1,0

Оптическая плотность

0,18 

0,315

0,44

0,52

0,55

0,00

0,61

Степень гемолиза (У)

0,295

0,516

0,721

0,852

0,902

1,0

lg[У/(1-У)]         

-0,384

0,028

0,412

0,760

0,964


                  V

                   50

           1,0 -----+--T-------T-------T-------x

           0,8 +----+--+-------+-------x-------+

           0,6 +----+--+-------+-------+-------+

значения   0,4 +----+--+-------x-------+-------+

логарифма  0,2 +----+--+-------+-------+-------+

У/(1-У)    0,0 +----\/-x-------+-------+-------+

          -0,1 +-------+-------+-------+-------+

          -0,2 x-------+-------+-------+--------

              1,5 мл  2,0 мл  2,5 мл  3,0 мл  3,5 мл

                        объем комплемента


Рис. 3. Титрование комплемента


3.3. Определение антикомплементарной активности

иммуноглобулина для внутривенного введения


Перед определением АКА проверяют рН тестируемого иммуноглобулина. Доводят, если это необходимо, рН до 6,5-7,5 с использованием 0,1 н раствора едкого натра. Определяют содержание белка в исследуемом образце иммуноглобулина. В пробу вносят 10 мг белка исследуемого иммуноглобулина. Поскольку содержание белка в анализируемых препаратах не всегда составляет 5,0% (50 мг/мл), то необходимо скорректировать объем иммуноглобулина, вносимого в пробу.


                            50 мг/мл x 0,2 мл

    Объем иммуноглобулина = -----------------, где

                                     C


C - концентрация иммуноглобулина в образе, мг/мл.

Объем ЖББР = 0,8 мл - Объем иммуноглобулина.

Например, если концентрация белка 48 мг/мл (4,8%), то в пробу вносят (50 x 0,2)/48 = 0,208 мл иммуноглобулина и 0,8 - 0,208 = 0,592 мл ЖББР. В пробы добавляют по 0,2 мл раствора комплемента, содержащего 100 CH50/мл. Конечный объем проб 1 мл. Контрольный образец содержит 0,2 мл раствора комплемента и 0,8 мл физиологического раствора. Пробы инкубируют 60 мин. при 37 град. С или 18 ч. при 4 град. С. По истечении срока инкубации пробы разбавляют в 50 раз, до конечного разведения 1:250. Для этого к 14,7 мл ЖББР добавляют 0,3 мл пробы и тщательно перемешивают. Проводят титрование остаточной активности комплемента (табл. 4). Затем в пробы добавляют по 1 мл суспензии сенсибилизированных эритроцитов и инкубируют 60 мин. при 37  град. С. Далее пробы охлаждают, центрифугируют и измеряют оптическую плотность, как описано выше. Определяют значение степени гемолиза У и логарифма соотношения [У/(1-У)]. Строят график на миллиметровой или логарифмической бумаге, откладывая по оси абсцисс объем внесенного образца, а по оси ординат - значения логарифма [У/(1-У)]. Определяют активность комплемента в опытных и контрольных пробах, как описано выше, т.е. находят объем образца, дающий степень гемолиза 0,5 (точка графика с ординатой 0). Рассчитывают содержание СН50 в исходных пробах с учетом разведения.


3.4. Учет результатов


Активность комплемента в опытных и контрольных пробах определяют, как описано в п. 3.2.4. Рассчитывают количество комплемента, связанного иммуноглобулином пробы, по формуле:


                          Ак - Аи

                          -------, где

                            10


Ак - активность комплемента в контрольной пробе, СН50/мл;

Аи - активность комплемента в исследуемой пробе, СН50/мл;

10 - количество иммуноглобулина в пробе, мг.


Результаты теста учитывают, если активность комплемента в контрольной пробе находится в пределах от 80 до 120 СН50/мл. В противном случае проводят повторный анализ. Иногда активность комплемента в опытных пробах больше, чем в контрольной. В таком случае антикомплементарную активность пробы считают равной нулю. Результаты выражают в количестве комплемента, связавшегося с 1 мг исследуемого иммуноглобулина, в СН50/мг.


3.4.1. Пример


В табл. 4 приведен пример определения АКА двух образцов иммуноглобулина.

Активность комплемента в контрольной пробе, исходя из табл. 4 и рис. 4 (не приводится), равна:


                          1 x 250

                          ------- = 100 СН50/мл, где

                            2,5


1 - количество CH50 в точке графика с ординатой 0;

2,5 - объем образца, вызывающий 50%-ный гемолиз;

250 - конечное разведение образца.

Значение находится в пределах от 80 до 120 СН50/мл, что подтверждает правильность проведения анализа.

В опытной пробе N 11 ед. СН50 содержится в объеме 2,1 мл, т.е. активность комплемента (1 x 250)/2,1 = 119 СН50. Поскольку активность комплемента в данной пробе не ниже, чем в контроле, считаем антикомплементарную активность образца равной 0 СН50/ мг.

В опытной пробе N 21 ед. СН50 находится в объеме 2,8 мл. Активность комплемента равна (1 x 250)/2,8 = 89 СН50/мл. Следовательно, 10 мг пробы связали (100 - 89) = 11 СН50. Таким образом, антикомплементарная активность образца 2 равна 1,1 СН50/мг белка.


Таблица 4


---------T-------------------------------------------T-----------¬

¦ Пробы  ¦              Номера пробирок              ¦ Параметры ¦

¦        +------T------T------T-----T------T----T----+           ¦

¦        ¦  1   ¦  2   ¦  3   ¦  4  ¦  5   ¦¦¦           ¦

¦        +------+------+------+-----+------+----+----+-----------+

¦        ¦ 1,5  ¦ 2,0  ¦ 2,5  ¦ 3,0 ¦ 3,5  ¦0   ¦0   ¦объем      ¦

¦        ¦      ¦      ¦      ¦     ¦      ¦    ¦    ¦пробы, мл  ¦

¦        +------+------+------+-----+------+----+----+-----------+

¦        ¦ 0    ¦ 0    ¦ 0    ¦ 0   ¦ 0    ¦0   ¦6,5 ¦объем воды,¦

¦        ¦      ¦      ¦      ¦     ¦      ¦    ¦    ¦мл         ¦

¦        +------+------+------+-----+------+----+----+-----------+

¦        ¦ 5,0  ¦ 4,5  ¦ 4,0  ¦3,5  ¦ 3,0  ¦6,5 ¦0   ¦объем ЖББР,¦

¦        ¦      ¦      ¦      ¦     ¦      ¦    ¦    ¦мл         ¦

¦        +------+------+------+-----+------+----+----+-----------+

¦        ¦ 1,0  ¦ 1,0  ¦ 1,0  ¦1,0  ¦ 1,0  ¦1,0 ¦1,0 ¦объем      ¦

¦        ¦      ¦      ¦      ¦     ¦      ¦    ¦    ¦суспензии  ¦

¦        ¦      ¦      ¦      ¦     ¦      ¦    ¦    ¦эритроцитов¦

+--------+------+------+------+-----+------+----+----+-----------+

¦опыт 1  ¦ 0,13 ¦ 0,215¦ 0,345¦0,420¦ 0,445¦0,03¦0,47¦оптическая ¦

¦опыт 2  ¦ 0,08 ¦ 0,140¦ 0,205¦0,300¦ 0,350¦    ¦    ¦плотность  ¦

¦контроль¦ 0,09 ¦ 0,150¦ 0,250¦0,340¦ 0,380¦    ¦    ¦проб       ¦

+--------+------+------+------+-----+------+----+----+-----------+

¦опыт 1  ¦ 0,227¦ 0,420¦ 0,716¦0,886¦ 0,947¦0   ¦1,0 ¦степень    ¦

¦опыт 2  ¦ 0,114¦ 0,250¦ 0,398¦0,614¦ 0,750¦    ¦    ¦гемолиза У ¦

¦контроль¦ 0,136¦ 0,273¦ 0,500¦0,705¦ 0,795¦    ¦    ¦           ¦

+--------+------+------+------+-----+------+----+----+-----------+

¦опыт 1  ¦ 0,294¦ 0,724¦ 2,52 ¦7,77 ¦17,867¦¦¦У/(1-У)    ¦

¦опыт 2  ¦ 0,129¦ 0,333¦ 0,661¦1,591¦ 3,000¦    ¦    ¦           ¦

¦контроль¦ 0,157¦ 0,376¦ 1,000¦2,56 ¦ 3,878¦    ¦    ¦           ¦

+--------+------+------+------+-----+------+----+----+-----------+

¦опыт 1  ¦-0,532¦-0,140¦ 0,401¦0,890¦ 1,252¦¦¦lg         ¦

¦опыт 2  ¦-0,889¦-0,478¦-0,180¦0,202¦ 0,477¦    ¦    ¦[У/(1-У)]  ¦

¦контроль¦-0,804¦-0,425¦ 0,000¦0,408¦ 0,589¦    ¦    ¦           ¦

L--------+------+------+------+-----+------+----+----+------------


Примечание. Данные, приведенные в табл. 4, являются средними величинами, рассчитанными в результате сравнения двух повторностей.


3.4.2. Заключение


Максимально допустимым для препаратов иммуноглобулинов считают связывание 1 СН50 на 1 мг белка.






Приложение


ОБОРУДОВАНИЕ


1. Спектрофотометр (СФ-26 или другой марки) или фотоэлектроколориметр (ФЭК-56 или другой марки).

2. Центрифуга (ЦУМ-1 или другой марки).

3. Термостат (ТС-80 или другой марки).

4. Холодильник бытовой (любой марки).

5. рН-метр (PH-150 или другой марки).

6. Весы аналитические (ВЛА-200 г-М или другой марки).

7. Колбы мерные на 1000 мл, ГОСТ 1770-74.

8. Колбы мерные на 25 мл, ГОСТ 1770-74.

9. Цилиндры мерные на 100 мл, ГОСТ 1770-74.

10. Микропипетки на 0,01 мл, ГОСТ 29228-91.

11. Пипетки на 1, 2, 5 мл, ГОСТ 29228-91.


РЕАКТИВЫ


1. Глюкоза, ГОСТ 6038-79.

2. Натрий лимонно-кислый трехзамещенный, ТУ 6-09-2248-77.

3. Натрий хлористый, ГОСТ 4243-77.

4. Лимонная кислота, ГОСТ 3652-69.

5. Кальций хлористый 2-водный, ГОСТ 4161-77.

6. Магний хлористый 6-водный, ГОСТ 4209-77.

7. Натрия гидроокись, ГОСТ 4328-77.

8. Натрий барбитуровокислый (мединал), ТУ 6-09-2082-78.

9. Барбитал (веронал)- импорт, производства "Сигма" или других фирм.

10. Кислота соляная, ГОСТ 3118-77.

11. Желатин пищевой, ГОСТ 11293-89.


Ассоциация содействует в оказании услуги в продаже лесоматериалов: березовые дрова купить по выгодным ценам на постоянной основе. Лесопродукция отличного качества.

Скачать:

Скачать: Определение антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов для внутривенного введения. Методические указания. МУК 3.3.2.1063-01
Скачать: Определение антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов для внутривенного введения. Методические указания. МУК 3.3.2.1063-01
Наши предложения:
  1. Статья. Юридические аспекты организации производства лекарственных средств в России
  2. Статья. Нормирование обращения ЛС в контексте закона О техническом регулировании
  3. Статья. Особенности Федерального закона О техническом регулировании
  4. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 09.02.2004 N 294-22/23
  5. Статья. Правовые основы создания этических комитетов: международный опыт и задачи для России
  6. Статья. Особенности деловой этики азартных игроков лекарственного рынка
  7. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 21.01.2004 N 295-22/14
  8. Постановление Госстандарта РФ от 16.01.2004 N 17-ст
  9. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 12.01.2004 N 294-22/2
  10. Статья. От GMP к системам качества XXI века
  11. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 31.12.2003 N 295-22/300
  12. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 26.12.2003 N 295-22/297
  13. Постановление Госстандарта РФ от 25.12.2003 N 383-ст
  14. Статья. Силовая борьба с барьерами
  15. Постановление Госстандарта РФ от 25.12.2003 N 384-ст
  16. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 24.12.2003 N 294-22/293
  17. Приказ Департамента здравоохранения г. Москвы от 23.12.2003 N 740
  18. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 23.12.2003 N 291-22/290
  19. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 17.12.2003 N 295-22/284
  20. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 16.12.2003 N 295-22/282
  21. Статья. Макроэкономические показатели состояния российского фармрынка и рейтинги фармдистрибьюторов
  22. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 08.12.2003 N 295-22/270
  23. Статья. Трагедия русского gcp, 2003
  24. Статья. Передний край борьбы за качество
  25. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 03.12.2003 N 295-22/265
  26. Статья. ФЗ О техническом регулировании - попытка безболезненного реформирования
  27. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 20.11.2003 N 295-22/256
  28. Статья. Обложение акцизами розлива этилового спирта в аптеках
  29. Статья. Этика работы с экспериментальными животными
  30. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 05.11.2003 N 295-22/247
  31. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 27.10.2003 N 293-22/233
  32. Приказ Минздрава РФ от 22.10.2003 N 494
  33. Вопрос: В связи с выходом приказа МЗ РФ N 460 от 23.09.2003 г.
  34. Приказ Минздрава РФ от 17.10.2003 N 486
  35. Приказ Минздрава РФ от 15.12.2002 N 384
  36. Статья. Основные направления государственного контроля фармацевтических субстанций
  37. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 14.10.2003 N 291-22/223
  38. Письмо Минздрава РФ от 10.10.2003 N 13-16/94
  39. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 09.10.2003 N 295-22/222
  40. Статья. GMP-2005: обратной дороги нет
  41. Статья. Можно ли составить представление о производстве, опираясь на результаты самоинспекции?
  42. Статья. Управленческий учет в целях эффективности лекарственной помощи
  43. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 29.09.2003 N 295-22/210
  44. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 29.09.2003 N 295-22/209
  45. Статья. Вопросы технического регулирования фармпроизводств
  46. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 04.09.2003 N 291-22/190
  47. Постановление Госстандарта РФ от 03.09.2003 N 101
  48. Вопрос: Может ли аптечное учреждение заниматься изготовлением спиртовых растворов согласно Перечню стандартных спиртовых растворов, разрешенных к изготовлению в аптеке в соответствии с действующей нормативной документацией (Приказ МЗ РФ N 308 от 21.10.1997) и производить их реализацию в пределах юридического лица (Приказ
  49. Статья. Прогнозирование производственно-экономической деятельности фармацевтических предприятий с использованием компонентно-регрессионных методов
  50. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 15.08.2003 N 295-22/181
  51. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 14.08.2003 N 291-22/179
  52. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 06.08.2003 N 291-22/175
  53. Статья. 2005 год - революция или эволюция?
  54. Статья. Гомеопатические лекарственные формы
  55. Статья. Реальные проблемы идеальных лекарств
  56. Статья. Неизвестная гомеопатия
  57. Статья. Основные направления государственного контроля лекарственных средств в свете внедрения GMP ЕС и вступления России в ВТО
  58. Статья. Биоэтические документы Совета Европы и российское законодательство
  59. Методические рекомендации по рациональному выбору названий лекарственных средств
  60. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 25.06.2003 N 295-22/125
  61. Статья. Локализация и механизмы действия лекарственных веществ. Мишени для лекарственных веществ
  62. Статья. Клинические испытания: этический аспект
  63. Приказ Минздрава РФ от 19.06.2003 N 266
  64. Приказ Минздрава РФ от 19.06.2003 N 267
  65. Приказ Минздрава РФ от 28.05.2003 N 223
  66. Статья. Способы повышения эффективности фармбизнеса: выстраивание холдинговой структуры
  67. Статья. Безопасность медикаментозной помощи: проблема мониторинга
  68. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 26.05.2003 N 294-22/99
  69. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 26.05.2003 N 295-22/98
  70. Статья. Законодательное и нормативное регулирование лекарственного обеспечения на уровне субъектов Российской Федерации
  71. Статья. Доказательная медицина в России: перспективы развития
  72. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 28.04.2003 N 295-22/86
  73. Приказ Минздрава РФ от 24.04.2003 N 172
  74. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 24.04.2003 N 295-22/82
  75. Приказ Минздрава РФ от 21.10.1997 N 309
  76. Постановление Главного государственного санитарного врача РФ от 18.04.2003 N 61
  77. Постановление Главного государственного санитарного врача РФ от 18.04.2003 N 60
  78. Правила организации чистых производств и контроля качества изделий медицинского назначения из полимеров, тканых и нетканых материалов, имеющих контакт с кровью. ПР 64-05-001-2002
  79. Продукция медицинской промышленности. Технологические регламенты производства. Содержание, порядок разработки, согласования и утверждения. ОСТ 64-02-003-2002
  80. Производство лекарственных средств. Документация. Общие требования. Примерные формы и рекомендации по их заполнению. Методические указания. МУ 64-04-003-2002
  81. Производство лекарственных средств. Документация. Общие требования. Примерные формы и рекомендации по их заполнению. Методические указания. МУ 64-04-003-2002
  82. Производство лекарственных средств. Документация. Общие требования. Примерные формы и рекомендации по их заполнению. Методические указания. МУ 64-04-003-2002
  83. Классификация и организация помещений для производства нестерильных лекарственных средств. Методические указания. МУ 64-02-005-2002
  84. Производство лекарственных средств. Персонал фармацевтических предприятий. Основные положения. Методические указания. МУ 64-09-001-2002
  85. Производство лекарственных средств. Документация. Методические указания. МУ 64-04-002-2002
  86. Производство лекарственных средств. Валидация. Основные положения. Методические указания. МУ 64-04-001-2002
  87. Производство лекарственных средств. Термины и определения. Методические указания. МУ 64-01-001-2002
  88. Постановление Главного государственного санитарного врача РФ от 15.04.2003 N 43
  89. Организация и контроль производства лекарственных средств стерильные лекарственные средства. Методические указания. МУ 42-51-1-93 + МУ 42-51-26-93
  90. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 14.04.2003 N 295-22/77
  91. Приказ Минздрава РФ от 04.04.2003 N 138
  92. Постановление Госстандарта РФ от 03.04.2003 N 107-ст
  93. Постановление Госстандарта РФ от 03.04.2003 N 108-ст
  94. Перечень названий лекарственных форм, используемых при регистрации лекарственных препаратов
  95. Приказ Минздрава РФ от 28.03.2003 N 128
  96. Статья. Государственная политика в условиях современного фармацевтического рынка. Меры по совершенствованию государственного регулирования лекарственного обеспечения
  97. Статья. Государство и аптека: эффективное партнерство?
  98. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 25.03.2003 N 295-22/56
  99. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 25.02.2003 N 294-22/34
  100. Статья. Особенности инновационного развития номенклатуры лекарственных средств в России
  101. Статья. Правовые основы проведения клинических исследований лекарственных препаратов
  102. Статья. Внедрение стандартов GMP на предприятиях отечественной фармпромышленности
  103. Рекомендации по стандартизации. Общие требования к информации изготовителя, сопровождающей медицинские изделия. Р 50.1.043-2003
  104. Письмо Минздрава РФ от 15.12.2002 N 2510/12411-02-32
  105. Приказ Минздрава РФ от 15.12.2002 N 383
  106. Статья. Закон преградит дорогу фальсификатам
  107. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 14.11.2002 N 296-22/202
  108. Статья. Новая фармация
  109. Статья. Лицензирование производства лекарственных средств и правила GMP как система нормативных правовых актов обеспечения качества лекарственных средств
  110. Статья. GMP шагает по стране...
  111. Статья. GMP: мировая практика и российская реальность
  112. Постановление Правительства РФ от 04.07.2002 N 500
  113. Статья. Методологические подходы к углубленному анализу и прогнозу деятельности производственных фармацевтических предприятий
  114. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 12.09.2002 N 296-22/146
  115. Приказ Минздрава РФ от 11.09.2002 N 282
  116. Постановление Госстандарта РФ от 04.09.2002 N 321-ст
  117. Постановление Госкомстата РФ от 14.12.2000 N 128
  118. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 26.08.2002 N 296-22/132
  119. Статья. Возможности анализа деятельности производственных предприятий с использованием экономико-математических методов
  120. Письмо Минздрава РФ от 14.08.2002 N 2510/8395-02-32
  121. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 14.08.2002 N 290-22/120
  122. Постановление Главного государственного санитарного врача РФ от 30.07.2002 N 26
  123. Приказ Минздрава РФ от 06.06.2002 N 189
  124. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 21.05.2002 N 296-16/2340
  125. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 29.12.2001 N 293-22/183
  126. Постановление Госстандарта РФ от 17.05.2002 N 191-ст
  127. Имплантаты офтальмологические. Интраокулярные линзы. Часть 1. Термины и определения. ГОСТ Р 51892-2002 (ИСО 11979-1-99)
  128. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 29.04.2002 N 293-22/63
  129. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 25.04.2002 N 296-22/62
  130. Приказ Минздрава РФ от 27.03.2002 N 96
  131. Статья. Феномены импортозамещения на лекарственном рынке
  132. Статья. Проблемы внедрения Правил GMP в России
  133. Постановление Правительства РФ от 30.07.1994 N 890
  134. Письмо Госгортехнадзора РФ от 07.02.2002 N 02-35/78
  135. Статья. Этика клинических испытаний
  136. Письмо Департамента госконтроля лексредств и медтехники Минздрава РФ от 21.01.2002 N 291-22/8
  137. Статья. Правила игры, или ОСТы для порядка
  138. Правила организации производства и контроля качества лекарственных средств (GMP). ОСТ 42-510-98
  139. Письмо Департамента госконтроля качества, эффективности, безопасности лексредств и медтехники Минздрава РФ от 26.11.2001 N 293-22/152
  140. Письмо Минздрава РФ от 22.11.2001 N 2510/11892-01-32
  141. Порядок государственного надзора за качеством медицинских иммунобиологических препаратов. Методические указания. МУ 3.3.2.1081-01
  142. Письмо Департамента госконтроля качества, эффективности, безопасности лексредств и медтехники Минздрава РФ от 31.10.2001 N 292-22/145
  143. Письмо Департамента госконтроля качества, эффективности, безопасности лексредств и медтехники Минздрава РФ от 25.10.2001 N 293-22/142
  144. Письмо Минздрава РФ, Департамента госконтроля лексредств и медтехники от 22.10.2001 N 291-22/140
  145. Вопрос: Проводится ли переконтроль субстанции антибиотика после истечения срока, указанного в сертификате качества? Если да, можно ли при положительных результатах переконтроля использовать эту субстанцию для производства лекарственной формы?
  146. Письмо Департамента госконтроля качества, эффективности, безопасности лексредств и медтехники Минздрава РФ от 28.09.2001 N 293-22/119
  147. Письмо Департамента госконтроля качества, эффективности, безопасности лексредств и медтехники Минздрава РФ от 25.09.2001 N 293-22/118
  148. Приказ Комитета здравоохранения г. Москвы от 12.09.2001 N 403
  149. Письмо Департамента госконтроля качества, эффективности, безопасности лексредств и медтехники Минздрава РФ от 28.08.2001 N 293-22/104
  150. Постатейный комментарий к Федеральному закону РФ от 22.06.1998 г. N 86-ФЗ О лекарственных средствах
  151. Тара потребительская полимерная для лекарственных средств. Общие технические условия. РД 64-800-01
  152. Приказ Минздрава РФ от 20.07.2001 N 284
  153. Определение антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов для внутривенного введения. Методические указания. МУК 3.3.2.1063-01
  154. Экспериментальное доклиническое изучение аддиктивного потенциала фармакологических средств. Методические рекомендации N 2000/112
  155. Приказ Комитета здравоохранения г. Москвы от 25.06.2001 N 253
  156. Письмо Главного государственного санитарного врача РФ от 18.06.2001 N 2510/6290-01-32
  157. Письмо Минздрава МО от 14.06.2001 N 5-15-11
  158. Общие требования к технологическому регламенту радиационной стерилизации изделий медицинского назначения однократного применения. Руководство. Р 2.6.4/3.5.4.1040-01
  159. Решение коллегии Минздрава РФ
  160. Указание Минздрава РФ от 06.02.2001 N 174-У
  161. Приказ Минздрава РФ от 31.01.2001 N 18
  162. Инструкция Порядок проведения контроля параметров воздушной среды в чистых помещениях и методы их измерений при производстве лекарственных средств. РДИ 42-505-00
  163. Графическое оформление лекарственных средств. общие требования. Методические указания. МУ 9467-015-05749470-98
  164. Приказ Минздрава РФ от 20.07.1998 N 217
  165. Письмо Департамента госконтроля качества, эффективности, безопасности лексредств и медтехники Минздрава РФ от 25.10.2000 N 291-22/132
  166. Письмо Департамента госконтроля качества, эффективности, безопасности лексредств и медтехники Минздрава РФ от 17.10.2000 N 293-22/123
  167. Письмо Минздрава РФ от 05.10.2000 N 2510/10800-32
  168. Решение коллегии Минздрава РФ
  169. Постановление Госстандарта РФ от 25.09.2000 N 232-ст
  170. Асептическое производство медицинской продукции. Часть 1. Общие требования. ГОСТ Р ИСО 13408-1-2000
  171. Постановление Госкомстата РФ от 16.08.2000 N 74
  172. Приказ Комитета здравоохранения г. Москвы от 14.07.2000 N 307
  173. Стерилизация медицинской продукции. Химические индикаторы. ГОСТ Р ИСО 11140-1-2000. Часть 1. Общие требования
  174. Распоряжение Мэра Москвы от 05.06.2000 N 592-РМ
  175. Информационное письмо МТУ МВТ от 23.05.2000 N 75
  176. Письмо Фармуправления МО от 20.04.2000 N 6-13-10
  177. Приказ Минздрава РФ от 24.03.2000 N 102
  178. Приказ Минздрава РФ от 24.03.2000 N 103
  179. Письмо Департамента госконтроля качества, эффективности, безопасности лексредств и медтехники Минздрава РФ от 14.03.2000 N 293-22/29
  180. Письмо Минэкономики РФ от 23.02.2000 N АС-216/26-188
  181. Приказ Минздрава РФ от 22.12.1999 N 448
  182. Приказ Минздрава РФ от 20.12.1999 N 446
  183. Приказ Минздрава РФ, Минэкономики РФ от 03.12.1999 N 432/512
  184. Упаковка стерильных лекарственных средств. Методические рекомендации N 99/145
  185. Приказ Минздрава РФ от 15.11.1999 N 412
  186. Вопрос: Какими зарегистрированными ценами следует руководствоваться при совместном производстве лекарственного препарата?
  187. Вопрос: До 1 июля 1999 г. продлены договоры, заключенные между инспекцией (Управлением) контроля лекарств и медтехники и российскими предприятиями. Как обстоят дела с договорами зарубежных предприятий - производителей?
  188. Приказ Минздрава РФ от 02.07.1999 N 266
  189. Приказ Минздрава РФ от 30.06.1999 N 253
  190. Письмо Комитета здравоохранения г. Москвы от 04.06.1999 N 1-04/1655
  191. Приказ Минздрава РФ от 13.05.1999 N 162
  192. Приказ Минздрава РФ от 15.04.1999 N 129
  193. Устройства комплексные эксфузионные, инфузионные и трансфузионные однократного применения. Требования химической и биологической безопасности. Методы испытаний в условиях предприятий-изготовителей. ОСТ 42-513-99
  194. Письмо Минздрава РФ от 15.03.1999 N 2510/2743-99-23
  195. Приказ Минздрава РФ от 05.01.1999 N 4
  196. Микробиологический мониторинг производственной среды. Методические указания. МУК 4.2.734-99
  197. Правила проведения качественных клинических испытаний в Российской Федерации. ОСТ 42-511-99
  198. Гигиеническое нормирование лекарственных средств в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе населенных мест и воде водных объектов. Методические указания. МУ 1.1.726-98
  199. Упаковка лекарственного растительного сырья и сухих лекарственных форм из растительного сырья. Методические рекомендации N 98/192
  200. Упаковка жидких нестерильных лекарственных препаратов. Методические рекомендации N 98/194

Части:

1| 2| 3| 4| 5| 6| 7| 8| 9| 10| 11| 12| 13| 14| 15|
16| 17| 18| 19| 20| 21| 22| 23| 24| 25| 26| 27| 28| 29| 30|
31| 32| 33| 34| 35|
Наши авторские проекты
Политики о Третейских судах
Законодательство
АЛППП © 2011
тел./факс: (8142) 796-288
Яндекс.Метрика